论文双抗体夹心ELISA法测定食物中虾过敏原成分，本文是食物论文参考文献范文和虾过敏原成分和抗体和ELISA方面毕业论文范文.
摘 要：本文通过双抗体夹心ELISA法的建立,对食物中虾过敏原成分进行测定,为预防和诊断食物过敏提供理论基础.
关键词：双抗体夹心ELISA法：测定：虾过敏原成分
年来,食物过敏症受到人们的关注,尤其是虾等甲壳类动物以及其制品均会引起食物过敏的现象,其过敏表现主要为荨麻疹、风疹、哮喘等,严重的甚至会对生命安全造成威胁.本文探究如何利用双抗体夹心ELISA法检测虾过敏原成分.
1材料和方法
1.1材料
本次实验中选取了来自某动物学院中心的4周龄小鼠和30例2017年2月至2018年2月到某医院就诊的尘螨皮试呈阳性的患者.收集患者血清进行,制备血清池,购买新鲜的虾.
1.2方法
在制备与纯化虾过敏原多克隆抗体的过程中,先首次免疫,取经过纯化的抗原蛋白10μg和等量的弗氏完全佐剂,混合乳化后,皮射到小鼠的颈部和背部.第2次加强免疫时,取与之前等量的抗原蛋白,再加入等量的不完全佐剂,免疫之间要相隔3周,第3次免疫后的第5 d,采集血,并进行离心后将血清分离出,进行抗血清纯化.将纯化好的抗体的原缓冲液用PBS进行替换,然后按照一定的比例将抗体和生物素混合,放置在避光处,一段时间后,按照说明书回收膜柱.
虾过敏原多克隆抗体制备完成后,利用双抗体夹心ELISA法测定虾过敏原,先采用吸附法包被虾过敏原多克隆抗体,在每个孔内加入100 μL包被缓冲液,放置在4.C的环境下过夜后将包被液倒掉,再采用同样的方法加入200μL的封闭液,搁置在37℃下振荡2h,将封闭液倒掉.在粗虾提取时,要按照比例稀释,每个孔内加入100 μL后,与PBS进行阴性对照.在37℃下振荡l h,然后用PBST清洗3遍.在对生物素标记的抗虾过敏原多克隆抗体稀释时,按照l：500的比例在每个孔内加入100μL的稀释液,在37℃下振荡l h,然后用PBST清洗3遍.以l：500的比例将HRB-链酶亲和素进行稀释,在每个孔内加入100 μL的稀释液,在37℃下振荡th,然后用PBST清洗3遍.将底物液加入,在37℃的环境下振荡10 min,读数并做好记录.
2测定结果
2.1鉴定抗虾过敏原的抗体
虾过敏原抗体能够对71、36、23、19等组分进行识别,因此,可判定此抗体能够对虾主要过敏原蛋白的组分36 Ku进行识别.
2.2对间接ELISA检测鼠虾过敏原蛋白多克隆抗体的i
gG效价
鼠虾过敏原蛋白多克隆抗体的lgG性孔的比值大于2.1定位测量标准,此时测得免疫血清的效价为1:204 800.
2.3双抗体夹心ELISA法测定虾成分过敏原成分的曲线
对标准的虾总蛋白提取液进行稀释,测定双抗体夹心ELISA法的检出限（如图2所示）.吸光值随着抗原浓度的降低而下降,以测定孔与阴性孔比值大于2.1为标准,得出虾蛋白的检出最低限为40 ng/mL,并且标准曲线在40～l 000 ng/mL之间的线性良好.
3讨论
相关研究显示即使是不同品种的虾产品,其过敏原实际上并没有变化.而通过本次研究,可以发现双抗体夹心ELISA法测定食物中虾过敏原成分具有较好的灵敏度和特异性,相比其效价的滴度曲线,如图1所示.
由图1可知,阴性组抗体的滴度随着吸光度的增加而下降,将阳性孔与阴他方法减少了抗体的用量.
本次研究没有完全测定出食品中虾过敏原含量,这可能是由于区域之间存在着较大的差异,但是为我国食品安全过敏原检测问题提供了技术标准,为更好地管理食品过敏原打好了基础.
归纳上述:上述文章是关于虾过敏原成分和抗体和ELISA方面的相关大学硕士和食物本科毕业论文以及相关食物论文开题报告范文和职称论文写作参考文献资料.
参考文献：
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