论文山茱萸环烯醚萜总苷提取工艺，本文是提取方面有关本科毕业论文范文和山茱萸和提取和工艺方面硕士学位论文范文.
赵艳艳,王晨霏,滕洋
(商洛学院生物医药与食品工程学院,陕西商洛726000)
摘 要：为了研究山茱萸中环烯醚萜苷类化合物的最佳提取工艺,以陕西省商洛市丹凤县产的山茱萸为原料,以环烯醚萜苷类化合物的提取率（按药材计算）为指标,考察提取溶剂、溶剂浓度、料液比、提取时间四个因素对环烯醚萜提取率的影响,进行工艺优化.确定的提取溶剂为甲醇,提取剂浓度为80%,料液比为1:15,提取时间为100 rrun,提取率约为18.7%.此提取工艺和提取方法具有良好的稳定性和重复性,可为山茱萸药材的进一步开发提供依据.
关键词：山茱萸；环烯醚萜总苷；提取
中图分类号：：R285 文献标识码：A 文章编号：1674-0033 (2016) 04-0040-04
收稿日期：2016-05-16
基金项目：商洛学院科研基金项目(14SKY-FWDF005)
作者简介：赵艳艳,女,陕西洛南人,硕士,讲师
环烯醚萜苷(iridoids)是一类广泛存在于植物界的化合物,大量分布于龙胆科、唇形科、玄参科、马鞭草科等双子叶植物中.环烯醚萜类化合物苷元结构简单,可修饰性强,生物活性广泛.研究表明环烯醚萜类化合物分子量较小,因具有极性官熊团导致其易溶于水、甲醇；可溶于乙醇、丙酮、正丁醇；难溶于、苯等亲脂性溶剂.山茱萸环烯醚萜总苷的提取方法主要有水浸提、甲醇回流提取、大孔树脂纯化、脱脂一甲醇回流法等.环烯醚萜类化合物在中药中分布较广,目前已发现一千余种.从山茱萸中提取、分离和鉴定的环烯醚萜类化合物已有16个,分别属于3种类型：环戊烷型环烯醚萜、裂环环烯醚萜类以及双环烯醚萜类.近年来大量山茱萸药理活性的物质基础研究结果表明,山茱萸的药理作用和保健活性物质基础主要是环烯醚萜苷类中的莫诺苷和马钱苷,能够抗炎、抗肿瘤等,并对神经系统和心血管系统有保护作用.山茱萸环烯醚萜作为山茱萸中的主要有效成分,已越来越受到重视,尤其在保护神经以及治疗糖尿病及其并发症方面表现出显著作用,有极高的研究和应用潜能.本研究对山茱萸环烯醚萜类化合物的提取工艺进行优化,以期得到一条提取率高、能耗低、污染小、经济方便的提取工艺路线.
1材料与方法
1.1仪器与药品
仪器：电子天平、超纯水制备仪、HH-6型电热恒温水浴锅（上海康华生化仪器制造厂1、DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱（上海齐欣科学仪器有限公司）、RE-52系列旋转蒸发器（北京科伟永兴仪器有限公司）.
药品：山茱萸（陕西省商洛市丹凤县）；无水乙醇（国药集团）；甲醇（国药集团）；三氯甲烷（国药集团）；冰醋酸（国药集团）.
1.2试验方法
1.2.1药材前处理
取山茱萸原料适量,8倍水浸泡过夜,过滤,95 010乙醇浸泡,过滤,干燥后粉碎过200目筛待用.
1.2.2环烯醚萜苷的提取
1)不同种类溶剂提取山茱萸中环烯醚萜总苷
精密称定3份,每份10 g的山茱萸粉末,分别用水,100%甲醇,100%乙醇提取,料液比为1:15,80℃提取,冷凝回流提取3次,每次2h,合并滤液,旋转蒸发仪蒸干,得到粗浸膏,计算粗浸膏得率,根据实验结果,确定提取溶剂.
2)不同浓度溶剂提取山茱萸环烯醚萜总苷
精密称定6份山茱萸粉末,每份10 g,用所确定的溶剂提取,料液比为1:15,溶剂浓度分别为50%,60%,70%,80%,90%,100%,80℃提取,冷凝回流提取3次,每次2h,合并滤液,旋转蒸发仪蒸干,得到粗浸膏,计算粗浸膏得率,确定溶剂浓度.
3)不同料液比提取山茱萸中环烯醚萜总苷
精密称定5份山茱萸粉末,每份10 g,用所确定的溶剂和浓度,将按照料液比为1:5、1:10、1:15、1:20、1:25,80℃提取,冷凝回流提取3次,每次2h,合并滤液,旋转蒸发仪蒸干,得到粗浸膏,计算粗浸膏得率,根据实验结果,确定料液比.
4)不同提取时间提取山茱萸中环烯醚萜总苷
精密称定5份山茱萸粉末,每份10 g,分别按照所确定的溶剂、浓度、料液比提取,提取时间分别为30、60、80、100、120 min,在80C下冷凝回流提取3次,合并滤液,旋转蒸发仪蒸干,得到粗浸膏,计算粗浸膏得率,根据实验结果,确定提取时间.
1.2.3验证试验
在上述单因素试验条件下,选择最佳提取溶剂、最佳浓度、最佳料液比和最佳提取时间,分别进行5次验证实验,计算提取率,并对优化后的条件进行验证.
1.2.4山茱萸中环烯醚萜苷类化合物的鉴别
将提取得到的环烯醚萜浸膏,放入烧杯中,加80%的乙醇溶解,利用多糖不溶于高浓度醇的特点,使糖析出,过滤,旋转蒸发浓缩,再加80%乙醇除糖,反复多次,得到除糖后的山茱萸环烯醚萜苷类化合物.以V（氯仿）：v（甲醇）：v（冰乙酸）等于3：1：0.01为展开剂,取莫诺苷和马钱苷为对照品,以10%硫酸乙醇溶液为显色剂,鉴别山茱萸环烯醚萜总苷.
2 结果与分析
2.1不同提取溶剂对山茱萸中环烯醚萜总苷出膏率的影响
采用冷凝回流提取山茱萸中环烯醚萜类化合物,根据相似相溶原理,提取溶剂从水、甲醇、乙醇这三个极性大的溶剂中优选,优选结果见图1. 由图1可见,在料液比为1:15,提取温度80℃,冷凝回流提取3次,每次2h的提取条件下,以水为提取溶剂时,得到的环烯醚萜总苷浸膏为1.64 g,出膏率为16.4%；以甲醇为提取溶剂时,得到的环烯醚萜总苷浸膏为1.83 g,出膏率为18.3%；以水为提取溶剂时,得到的环烯醚萜总苷浸膏为1.76 g,出膏率为17.6%.这是因为溶剂的性质不同,对各种化学成分的溶解性不同,导致提取出的化学成分和出膏量也不同.在本研究中,以甲醇作提取溶剂时的出膏量最高,乙醇次之,水最少,所以选择甲醇作为提取溶剂.
2.2甲醇浓度对环烯醚萜出膏率的影响
在料液比为1:15,提取温度80℃,冷凝回流提取3次,每次2h的提取条件下,提取环烯醚萜总苷,提取结果见图2.当甲醇浓度分别为50%,60%,70%,80%,90%,100%时,浸膏提取率分别为15.4%、16.5%、17.5%、18.6%、18.5%和18.3%,可见随着甲醇浓度的增大,环烯醚萜总苷提取率增大,当甲醇浓度为80%时环烯醚萜提取率最高,此后随着甲醇浓度的升高,环烯醚萜提取率基本保持不变,根据经济性和对环境的影响考虑,选择80%的甲醇提取山茱萸中环烯醚萜总苷.
2.3料液比对环烯醚萜出膏量的影响
由图3可见,在以80%的甲醇为提取溶剂,提取温度80℃,冷凝回流提取3次,每次2h的条件下,料液比为分别为1:5、1:10、1:15、1:20、1:25时,浸膏提取率分别为14.9%、15.6%、18.6%、18.0%和18.1%,可见随着料液比的增加,环烯醚萜出膏率显著增大,当料液比达到1:15以上时,环烯醚萜总苷提取率变化不大.这一结果与环烯醚萜苷类化合物在80%甲醇中的溶解度有关,当料液比较小时,山茱萸中的环烯醚萜只有少部分溶于甲醇中,其余仍停留在细胞内,造成环烯醚萜苷提取率较低,随着甲醇用量的增加,环烯醚萜苷提取率增大.当料液比达到1:15以后,山茱萸粉末中所含的环烯醚萜被完全溶解,之后再增大甲醇用量,环烯醚萜苷提取率基本不变.因此,选择最佳料液比为1:15.
2.4提取时间对环烯醚萜出膏量的影响
提取量与提取时间成正比,在一定条件下,提取时间越长,提取量越大.但是,时间过长,扩散系数小,导致杂质会被提取出来,而提取量变化也不大.由图4可知,在其他条件不变的情况下,随着提取时间的增加,环烯醚萜出膏量逐渐增大,100 min后环烯醚萜出膏量增加情况趋于稳定,说明提取100 min可将山茱萸中环烯醚萜总苷提取出来,此后再增加提取时间环烯醚萜提取率基本不变.因此选择100 min作为提取时间.
2.5验证试验
在提取溶剂为甲醇、提取浓度80%、料液比为1：15、提取时间100 min的条件下,进行5次验证实验,由表1可见,环烯醚萜总苷提取率的平均提取率为18.66%,说明优化后的实验条件可信.
2.6薄层色谱鉴别甲醇提取产物
由图5可知,当以V（氯仿）：V（甲醇）：V（冰乙酸）等于3:1: 0.01为展开剂时,莫诺苷的Rf值为0.79,马钱苷的Rf值为0.32.山茱萸环烯醚萜总苷的薄层色谱结果为五个斑点,其中有两个斑点的Rf值分别与莫诺苷和马钱苷一致,说明提取的产物中有莫诺苷和马钱苷.
3结论与讨论
山茱萸环烯醚萜类化合物的提取方法较多.由于环烯醚萜苷类化合物极性较大,根据相似相溶原理,本研究考察了水、甲醇和乙醇作为提取溶剂对环烯醚萜总苷提取率的影响,结果显示甲醇提取效果最好,因此采用甲醇冷凝回流提取法.该方法具有条件温和、不引入杂质、无污染等优点,而且不易破坏环烯醚萜的立体结构和生物活性,能比较温和地将植物组织分解,加速有效成分的释放,从而提高提取率.在单因素实验的基础上,考查甲醇浓度、料液比、提取时间对山茱萸环烯醚萜总苷提取率的影响,并通过重复试验对单因素实验优化结果进行验证,结果当甲醇浓度为80%,料液比为1:15,提取时间为100 min时,环烯醚萜总苷的平均提取率为18.66%.参考中国药典2015版的鉴别方法,采用薄层色谱法鉴别提取产物,所用硅胶板为高效G板,展开剂为V（氯仿）：V（甲醇）：V(冰乙酸)等于3：1：0.01,结果提取产物在硅胶板上表现为5个斑点,其中有两个斑点的Rf值分别与莫诺苷和马钱苷一致,表明提取的产物中确实为环烯醚萜苷.
（责任编辑：李堆淑）
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参考文献：
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