论文荷兰系803马铃薯茎尖分化成苗的培养基优化筛选，该文是荷兰系方面有关专科毕业论文范文和马铃薯和培养基和分化有关专科毕业论文范文.
李 金,闫玉华,刘鸿岩,宋晓曦,黄凤智
（大连市旅顺口区农业技术推广中心,辽宁大连 116041）
摘 要：荷兰系803马铃薯无菌苗为材料,38℃、4h热处理4周,剥离带1个叶原基的茎尖,接种至不同浓度KT、NAA组合的24种MS固体培养基上,22℃、16h培养20天后观察统计茎尖的愈伤组织诱导率和分化成苗率,结果表明,最适宜荷兰系803马铃薯茎尖分化成苗的培养基为MS＋0.25mg/L KT＋0.10mg/L NAA,愈伤组织诱导率为75.0%,分化成苗率为47.3%.
关键词：荷兰系803马铃薯；茎尖；分化成苗；培养基优化
荷兰系803马铃薯是近年来从内蒙古牙克石引进的优良品种,该品种具有抗性强、产量高、品质优的特点.但随着种植年代的增加,不同病毒或类病毒在块茎体内不断积累,造成产量和品质逐年下降.因此,及时、有效地控制病毒的传播是做好脱毒马铃薯产业的关键.目前,国内关于荷兰系803马铃薯茎尖分化成苗的文献报道较少.本研究针对荷兰系803马铃薯茎尖分化成苗率较低的原因,结合热处理茎尖剥离脱除病毒,筛选荷兰系803马铃薯茎尖分化成苗最适宜的培养基,为脱毒苗扩繁和种薯繁育奠定基础.
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 荷兰系803马铃薯无菌苗.采集田间荷兰系803马铃薯植株的块茎,低温休眠后,室温暗处催芽,消毒后接种在MS固体培养基上培养,待成苗后扩繁,从而建立马铃薯无菌苗体系.
1.1.2 药品和试剂.培养基及不同植物生长调节剂所含药品均购自杭州木木生物科技有限公司.
1.2 方法
1.2.1 热处理.取生长至高约1～2cm的马铃薯无菌苗,在植物培养箱内升温1℃/天驯化20天左右,然后38℃光照培养4h、22℃光照培养12h,光照度3 000lux,最后20℃暗培养8h,变温热处理4周.
1.2.2 培养基组成.以MS为基本培养基,添加不同质量浓度配比的植物生长调节剂,其中,细胞分裂素KT的6个浓度分别为0、0.05、0.15、0.25、0.35、0.45mg/L,生长素NAA的4个浓度分别为0、0.05、0.10、0.15mg/L,共组成24种培养基,蔗糖30g/L,琼脂粉4g/L,pH5.8.
1.2.3 茎尖剥离与接种.剪取热处理后长势较好的无菌苗,用解剖针在40倍的解剖镜下进行茎尖剥离.因剥离茎尖越大,成活率越高,但脱毒率低,为提高再生苗的脱毒率,试验全部剥离带1个叶原基的茎尖,茎尖大小约0.1～0.2mm,壮苗茎尖稍大,弱细苗茎尖稍小.培养温度22℃,光照时间16h/天,光照度3 000lux.为了降低污染率,每个试管只接种1个茎尖,每个处理的培养基接种50个茎尖.10天后观察并记录茎尖生长情况,20天后统计茎尖的愈伤组织诱导率、分化成苗率.愈伤组织诱导率＝形成愈伤组织数量/接种茎尖数量×100%；分化成苗率＝分化成苗数量/接种茎尖数量×100%.
2 结果与分析
2.1 不同激素组合的培养基对茎尖分化成苗的影响
剥离带1个叶原基的茎尖接种在不同激素组合的24种培养基中均能形成愈伤组织,A6培养基的愈伤织诱导率最低,为37.5%；A13和A19培养基愈伤组织诱导率最高,为82.9%,表明荷兰系803马铃薯的茎尖分生组织容易发生脱分化.但是茎尖分化成苗率相对低且差异较大,A19培养基没有分化成苗,A16培养基诱导愈伤组织再分化的能力最高,分化成苗率达47.3%,A17和A23培养基的分化成苗率也比较高,分别为37.2%和32.4%.所以,最适合荷兰系803马铃薯的茎尖分化成苗的培养基为MS＋0.25mg/L KT＋0.10mg/L NAA.
2.2 荷兰系803马铃薯茎尖分化成苗过程
分析观察茎尖生长点的生长情况发现,除由茎尖剥离技术引起生长点破坏或接种速度慢造成茎尖失水而死亡外,8～12天时均能形成淡绿色的愈伤组织.20天后愈伤组织可分化出幼芽和单条主根,30天后观察成苗情况发现,除A19培养基只形成愈伤组织和根系而不能分化成苗外,其他23种培养基均能诱导愈伤组织分化成苗.不同培养基诱导分化再生苗的生长势有所差异,分化成苗低的培养基,再生苗一般表现出植株茎干矮小纤细或茎干粗细不均、叶片稀少等现象；分化成苗率高的培养基,如A16、A17培养基上生长的再生苗长势多数较好,表现为植株茎杆健壮均匀、叶片大而绿、根系多且发达.由于通过愈伤组织形成再生苗可能发生变异,试验中发现个别再生苗虽生长健壮却失去荷兰系803茎干原有的紫红色,叶片和茎干均为绿色,但扩繁后的再生苗又恢复了茎干的紫红色,是否发生变异还需通过逐代繁殖的田间植株表现来验证或分子遗传学分析鉴定.
3 小结与讨论
热处理结合茎尖组织培养法是国内外普遍应用的马铃薯脱毒技术,能有效地脱除危害马铃薯生长的常见病毒和类病毒.茎尖组织培养法实质是剥离茎尖生长点的分生组织,剥离茎尖大小与脱毒程度有直接关系,剥离茎尖大,不易脱毒,剥离茎尖小,病毒易脱除但不易成活.本试验为获得脱毒效果更好的再生苗,以剥离带1个叶原基的茎尖为外植体,但同时降低了茎尖分化成苗率,与国内多数学者剥离带1～2或2～3个叶原基的试验区别较大.不同品种的马铃薯由于基因型和生理特性不同,需要不同的培养基环境.因此,筛选不同浓度激素及合适配比的培养基,对提高脱毒马铃薯茎尖分化成苗效果尤为重要.通过对不同品种茎尖分化成苗的培养基筛选试验发现,荷兰系803马铃薯是较难分化成苗的一个品种,虽然A16、A17和A23培养基的分化成苗率较高,在此基础上还可探索更合适的培养基,由于培养环境、其他类型激素组合的培养基对茎尖分化成苗的影响也需进一步去研究.
参考文献
[1] 盖琼辉,王季春.马铃薯茎尖分化成苗的培养基优化研究[J].西南农业大学学报：自然科学版,2005,27（3）：370-373.
[2] 冯光惠,杜虎平,李夏隆,等.费乌瑞它马铃薯茎尖分化成苗的培养基筛选与病毒的RT-PCR检测[J].湖北农业科学,2014,53（20）：4988-4991.
结束语，上述文章是适合马铃薯和培养基和分化论文写作的大学硕士及关于荷兰系本科毕业论文，相关荷兰系开题报告范文和学术职称论文参考文献.
参考文献：
1、 茎尖菜用甘薯新品种薯绿1号 “薯绿1号”是以“台农71”为母本,以“广薯菜2号”为父本,通过定向有性杂交选育而成的菜用甘薯专用新品种 适合江苏、山东、河南、.
2、 甘薯茎尖脱毒组培快繁技术 甘薯是我国重要的农作物之一,年产量仅次于水稻、小麦和玉米 甘薯以其甘甜可口的特点深得人们的喜爱 此外,甘薯很容易种植,选择水分大、不过于贫瘠的地方插入薯苗即可 因甘薯抗逆性强、用途广……优良品质,在未.
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